{"id":3519,"date":"2019-04-18T15:38:54","date_gmt":"2019-04-18T13:38:54","guid":{"rendered":"https:\/\/www.rct-online.de\/magazin\/?p=3519"},"modified":"2025-06-17T10:42:09","modified_gmt":"2025-06-17T08:42:09","slug":"hplc-biochemische-forschung","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.rct-online.de\/magazin\/hplc-biochemische-forschung\/","title":{"rendered":"HPLC \u2013 Eine Methode f\u00fcr die biochemische Forschung"},"content":{"rendered":"<div id=\"ez-toc-container\" class=\"ez-toc-v2_0_73 ez-toc-wrap-center counter-hierarchy ez-toc-counter ez-toc-white ez-toc-container-direction\">\n<div class=\"ez-toc-title-container\">\n<p class=\"ez-toc-title\" style=\"cursor:inherit\">Inhaltsverzeichnis<\/p>\n<span class=\"ez-toc-title-toggle\"><a href=\"#\" class=\"ez-toc-pull-right ez-toc-btn ez-toc-btn-xs ez-toc-btn-default ez-toc-toggle\" aria-label=\"Toggle Table of Content\"><span class=\"ez-toc-js-icon-con\"><span class=\"\"><span class=\"eztoc-hide\" style=\"display:none;\">Toggle<\/span><span class=\"ez-toc-icon-toggle-span\"><svg style=\"fill: #999;color:#999\" xmlns=\"http:\/\/www.w3.org\/2000\/svg\" class=\"list-377408\" width=\"20px\" height=\"20px\" viewBox=\"0 0 24 24\" fill=\"none\"><path d=\"M6 6H4v2h2V6zm14 0H8v2h12V6zM4 11h2v2H4v-2zm16 0H8v2h12v-2zM4 16h2v2H4v-2zm16 0H8v2h12v-2z\" fill=\"currentColor\"><\/path><\/svg><svg style=\"fill: #999;color:#999\" class=\"arrow-unsorted-368013\" xmlns=\"http:\/\/www.w3.org\/2000\/svg\" width=\"10px\" height=\"10px\" viewBox=\"0 0 24 24\" version=\"1.2\" baseProfile=\"tiny\"><path d=\"M18.2 9.3l-6.2-6.3-6.2 6.3c-.2.2-.3.4-.3.7s.1.5.3.7c.2.2.4.3.7.3h11c.3 0 .5-.1.7-.3.2-.2.3-.5.3-.7s-.1-.5-.3-.7zM5.8 14.7l6.2 6.3 6.2-6.3c.2-.2.3-.5.3-.7s-.1-.5-.3-.7c-.2-.2-.4-.3-.7-.3h-11c-.3 0-.5.1-.7.3-.2.2-.3.5-.3.7s.1.5.3.7z\"\/><\/svg><\/span><\/span><\/span><\/a><\/span><\/div>\n<nav><ul class='ez-toc-list ez-toc-list-level-1 ' ><li class='ez-toc-page-1 ez-toc-heading-level-2'><a class=\"ez-toc-link ez-toc-heading-1\" href=\"https:\/\/www.rct-online.de\/magazin\/hplc-biochemische-forschung\/#Was_ist_Fluessigchromatographie\" title=\"Was ist Fl\u00fcssigchromatographie?\">Was ist Fl\u00fcssigchromatographie?<\/a><\/li><li class='ez-toc-page-1 ez-toc-heading-level-2'><a class=\"ez-toc-link ez-toc-heading-2\" href=\"https:\/\/www.rct-online.de\/magazin\/hplc-biochemische-forschung\/#Wie_funktioniert_die_HPLC\" title=\"Wie funktioniert die HPLC?\">Wie funktioniert die HPLC?<\/a><\/li><li class='ez-toc-page-1 ez-toc-heading-level-2'><a class=\"ez-toc-link ez-toc-heading-3\" href=\"https:\/\/www.rct-online.de\/magazin\/hplc-biochemische-forschung\/#Anwendungsbreite_einer_Hochleistungsfluessigkeitschromatographie\" title=\"Anwendungsbreite einer Hochleistungsfl\u00fcssigkeitschromatographie\">Anwendungsbreite einer Hochleistungsfl\u00fcssigkeitschromatographie<\/a><\/li><li class='ez-toc-page-1 ez-toc-heading-level-2'><a class=\"ez-toc-link ez-toc-heading-4\" href=\"https:\/\/www.rct-online.de\/magazin\/hplc-biochemische-forschung\/#Bedeutung_in_der_Biochemie\" title=\"Bedeutung in der Biochemie\">Bedeutung in der Biochemie<\/a><\/li><\/ul><\/nav><\/div>\n<p style=\"text-align: justify;\">HPLC steht f\u00fcr High Performance Liquid Chromatography, auf Deutsch Hochleistungsfl\u00fcssigkeitschromatographie. Sie wird sowohl f\u00fcr pr\u00e4parative wie auch analytische Stofftrennungen eingesetzt. Besonders hilfreich ist die HPLC f\u00fcr die Biochemie bei der Pr\u00e4paration und Analyse von Stoffen mit hohen Molekulargewichten wie Proteinen.<\/p>\n<h2><span class=\"ez-toc-section\" id=\"Was_ist_Fluessigchromatographie\"><\/span>Was ist Fl\u00fcssigchromatographie?<span class=\"ez-toc-section-end\"><\/span><\/h2>\n<p style=\"text-align: justify;\">Bei der Chromatographie handelt es sich um ein Trennverfahren, bei dem ein Stoffgemisch mit Hilfe von zwei Phasen, einer station\u00e4ren und einer mobilen Phase, aufgetrennt wird. Wenn von Fl\u00fcssigchromatographie die Rede ist, dann ist die station\u00e4re Phase ein Feststoff, die mobile Phase eine Fl\u00fcssigkeit. Sie wird als Eluent bezeichnet.<\/p>\n<blockquote>\n<p style=\"text-align: justify;\">Die mobile Phase bewegt sich an der station\u00e4ren Phase vorbei und das zu trennende Gemisch wird dabei entsprechend der Wechselwirkungen zwischen der jeweiligen Substanz und der station\u00e4ren Phase in seinem Durchlauf verz\u00f6gert und dadurch aufgetrennt.<\/p>\n<\/blockquote>\n<p style=\"text-align: justify;\">Als station\u00e4re Phase k\u00f6nnen verschiedene Stoffe dienen: Bei der Papierchromatographie sind dies spezielle Filterpapiere; bei S\u00e4ulen- und D\u00fcnnschichtchromatographie werden meist Kieselgel oder Aluminiumoxid verwendet. Die mobilen Phasen reichen von unpolaren L\u00f6sungsmitteln, wie Hexan, bis zu polaren L\u00f6sungsmitteln, wie Wasser.<\/p>\n<h2><span class=\"ez-toc-section\" id=\"Wie_funktioniert_die_HPLC\"><\/span>Wie funktioniert die HPLC?<span class=\"ez-toc-section-end\"><\/span><\/h2>\n<p style=\"text-align: justify;\">Die HPLC ist im Grunde eine technisch optimierte S\u00e4ulenchromatographie. Bei diesem Trennverfahren dr\u00fcckt eine Pumpe kontinuierlich mit 50 \u2013 400 bar den Eluenten, also die mobile Phase, m\u00f6glichst pulsationsarm durch die Chromatographies\u00e4ule, die mit der festen station\u00e4ren Phase gef\u00fcllt ist.<\/p>\n<p style=\"text-align: justify;\">Wird am S\u00e4ulenanfang eine Probe mit Hilfe eines Injektors eingespritzt, erfolgt die Auftrennung in der S\u00e4ule. Ein nachgeschalteter Detektor misst ein zur eluierten Komponentenmenge proportionales Signal, um dieses anschlie\u00dfend als Graphik, dem sogenannten Chromatogramm, auszugeben und zu qualifizieren. Im Idealfall repr\u00e4sentiert jeder Peak eines Chromatogramms eine Komponente des Stoffgemischs.<\/p>\n<figure id=\"attachment_3522\" aria-describedby=\"caption-attachment-3522\" style=\"width: 600px\" class=\"wp-caption aligncenter\"><img loading=\"lazy\" decoding=\"async\" class=\"wp-image-3522 size-full\" title=\"HPLC-Pumpe\" src=\"https:\/\/www.rct-online.de\/magazin\/wp-content\/uploads\/2019\/05\/hplc-pumpe.jpg\" alt=\"hplc-pumpe\" width=\"600\" height=\"405\" srcset=\"https:\/\/www.rct-online.de\/magazin\/wp-content\/uploads\/2019\/05\/hplc-pumpe.jpg 600w, https:\/\/www.rct-online.de\/magazin\/wp-content\/uploads\/2019\/05\/hplc-pumpe-300x203.jpg 300w, https:\/\/www.rct-online.de\/magazin\/wp-content\/uploads\/2019\/05\/hplc-pumpe-110x75.jpg 110w\" sizes=\"(max-width: 600px) 100vw, 600px\" \/><figcaption id=\"caption-attachment-3522\" class=\"wp-caption-text\">\u00a9 Ioana Davies (Drutu) \u2013 stock.adobe.com<\/figcaption><\/figure>\n<p style=\"text-align: justify;\">Gebr\u00e4uchliche Detektoren sind zum Beispiel UV-Absorptions-, Brechungsindex- oder Fluoreszenz-Detektoren. Durch R\u00fcckf\u00fchrung von reinen, nicht mit Probe verunreinigten Eluenten, kann der L\u00f6semittelverbrauch einer solchen Anlage deutlich gesenkt werden.<\/p>\n<p style=\"text-align: justify;\">Im Unterschied zur einfachen S\u00e4ulenchromatographie, die ohne Druck arbeitet, sind bei der Hochleistungsfl\u00fcssigkeitschromatographie die Probenmengen wesentlich kleiner, die Elutionsgeschwindigkeit deutlich h\u00f6her und die Trennleistung sehr viel besser.. Durch einen S\u00e4ulenofen kann die HPLC-S\u00e4ule zus\u00e4tzlich beheizt werden, wodurch sich die Wechselwirkungsprozesse zwischen mobiler und station\u00e4rer Phase \u00e4ndern und damit die Trennleistung der S\u00e4ule beeinflussen.<\/p>\n<figure id=\"attachment_3533\" aria-describedby=\"caption-attachment-3533\" style=\"width: 600px\" class=\"wp-caption aligncenter\"><img loading=\"lazy\" decoding=\"async\" class=\"wp-image-3533 size-full\" title=\"HPLC System Agilent 1200\" src=\"https:\/\/www.rct-online.de\/magazin\/wp-content\/uploads\/2019\/05\/HPLC-System-Agilent-1200.jpg\" alt=\"HPLC System Agilent 1200\" width=\"600\" height=\"800\" srcset=\"https:\/\/www.rct-online.de\/magazin\/wp-content\/uploads\/2019\/05\/HPLC-System-Agilent-1200.jpg 600w, https:\/\/www.rct-online.de\/magazin\/wp-content\/uploads\/2019\/05\/HPLC-System-Agilent-1200-225x300.jpg 225w\" sizes=\"(max-width: 600px) 100vw, 600px\" \/><figcaption id=\"caption-attachment-3533\" class=\"wp-caption-text\">Das moderne HPLC System Agilent 1200 | \u00a9 Kommando \u2013 en.wikipedia.org<\/figcaption><\/figure>\n<p style=\"text-align: justify;\">Bei Ger\u00e4ten zur Ultrahochleistungsfl\u00fcssigkeitschromatographie (UHPLC) werden noch kleinere Partikel und gleichzeitig noch k\u00fcrzere und d\u00fcnnere S\u00e4ulen verwendet und somit die Trennleistung weiter optimiert.<\/p>\n<p style=\"text-align: justify;\">Im Folgenden gehen wir kurz auf die \u00fcblichen Baugruppen einer HPLC ein:<\/p>\n<p><img loading=\"lazy\" decoding=\"async\" class=\"aligncenter wp-image-3572 size-full\" title=\"HPLC Eluent\" src=\"https:\/\/www.rct-online.de\/magazin\/wp-content\/uploads\/2019\/04\/hplc-eluent-probe.jpg\" alt=\"hplc-eluent-probe\" width=\"600\" height=\"313\" srcset=\"https:\/\/www.rct-online.de\/magazin\/wp-content\/uploads\/2019\/04\/hplc-eluent-probe.jpg 600w, https:\/\/www.rct-online.de\/magazin\/wp-content\/uploads\/2019\/04\/hplc-eluent-probe-300x157.jpg 300w\" sizes=\"(max-width: 600px) 100vw, 600px\" \/><\/p>\n<ul style=\"text-align: justify;\">\n<li>Probeninjektion<\/li>\n<\/ul>\n<p style=\"text-align: justify;\">Die Injektion der gel\u00f6sten Probe erfolgt \u00fcblicherweise mit Hilfe von Probenschleifen mit definiertem Volumen, in die die Probe zun\u00e4chst eingeschleust wird. Ein Sechswegeventil erm\u00f6glicht nach Umschalten, dass der Eluent durch die mit der Probe geladenen Schleife flie\u00dft und dadurch die Probe auf der S\u00e4ule aufgebracht wird.<\/p>\n<p style=\"text-align: justify;\">Im Nieder- und Mitteldruckbereich ist auch die Probeninjektion mittels Dosierspritze m\u00f6glich. Im Routinebetrieb reduziert ein Autosampler den manuellen Arbeitsaufwand. Die Injektionsvolumina sind vom S\u00e4ulendurchmesser abh\u00e4ngig und liegen in der Regel bei nur 1 \u00b5l bis 2 ml.<\/p>\n<figure id=\"attachment_3527\" aria-describedby=\"caption-attachment-3527\" style=\"width: 600px\" class=\"wp-caption aligncenter\"><img loading=\"lazy\" decoding=\"async\" class=\"wp-image-3527 size-full\" title=\"Autosampler in der Chromatographie\" src=\"https:\/\/www.rct-online.de\/magazin\/wp-content\/uploads\/2019\/05\/autosampler-chromatographie.jpg\" alt=\"autosampler-chromatographie\" width=\"600\" height=\"402\" srcset=\"https:\/\/www.rct-online.de\/magazin\/wp-content\/uploads\/2019\/05\/autosampler-chromatographie.jpg 600w, https:\/\/www.rct-online.de\/magazin\/wp-content\/uploads\/2019\/05\/autosampler-chromatographie-300x201.jpg 300w, https:\/\/www.rct-online.de\/magazin\/wp-content\/uploads\/2019\/05\/autosampler-chromatographie-110x75.jpg 110w\" sizes=\"(max-width: 600px) 100vw, 600px\" \/><figcaption id=\"caption-attachment-3527\" class=\"wp-caption-text\">\u00a9 Yen-yu Shih \u2013 stock.adobe.com<\/figcaption><\/figure>\n<ul>\n<li style=\"text-align: justify;\">Chromatographies\u00e4ule<\/li>\n<\/ul>\n<p style=\"text-align: justify;\">Da mit hohen Dr\u00fccken bis 400 bar gearbeitet wird, werden S\u00e4ulen aus dickwandigem Glas verwendet, das aus Sicherheitsgr\u00fcnden meist mit einem druckbest\u00e4ndigem Edelstahlrohr ummantelt ist. Hochdruckfeste S\u00e4ulen aus Edelstahl k\u00f6nnen hingegen wegen der Empfindlichkeit vieler bioaktiver Stoffe gegen\u00fcber Schwermetallen f\u00fcr biochemische Arbeiten kaum eingesetzt werden. Gelegentlich kommen jedoch auch S\u00e4ulen aus bioinertem Titan zum Einsatz. Die effektiven Innendurchmesser von HPLC-S\u00e4ulen betragen im Regelfall nur wenige Millimeter.<\/p>\n<p><center><a href=\"https:\/\/www.rct-online.de\/de\/schlaeuche\/harte-kunststoffschlaeuche-kunststoffrohre\/peek-schlaeuche\/peek-hochdruck-kapillarschlauch-gestreift\"><img loading=\"lazy\" decoding=\"async\" class=\"alignnone wp-image-3537 size-full\" title=\"PEEK-Hochdruck-Kapillarschlauch | gestreift\" src=\"https:\/\/www.rct-online.de\/magazin\/wp-content\/uploads\/2019\/05\/peek-hochdruck-kapillarschlauch-gestreift.jpg\" alt=\"peek-hochdruck-kapillarschlauch-gestreift\" width=\"300\" height=\"300\" srcset=\"https:\/\/www.rct-online.de\/magazin\/wp-content\/uploads\/2019\/05\/peek-hochdruck-kapillarschlauch-gestreift.jpg 300w, https:\/\/www.rct-online.de\/magazin\/wp-content\/uploads\/2019\/05\/peek-hochdruck-kapillarschlauch-gestreift-150x150.jpg 150w\" sizes=\"(max-width: 300px) 100vw, 300px\" \/><\/a> <a href=\"https:\/\/www.rct-online.de\/de\/schlaeuche\/harte-kunststoffschlaeuche-kunststoffrohre\/peek-schlaeuche\/peek-hochdruck-kapillarschlauch-unifarbig\"><img loading=\"lazy\" decoding=\"async\" class=\"alignnone wp-image-3538 size-full\" title=\"PEEK-Hochdruck-Kapillarschlauch | unifarbig\" src=\"https:\/\/www.rct-online.de\/magazin\/wp-content\/uploads\/2019\/05\/peek-hochdruck-kapillarschlauch-unifarbig.jpg\" alt=\"peek-hochdruck-kapillarschlauch-unifarbig\" width=\"300\" height=\"300\" srcset=\"https:\/\/www.rct-online.de\/magazin\/wp-content\/uploads\/2019\/05\/peek-hochdruck-kapillarschlauch-unifarbig.jpg 300w, https:\/\/www.rct-online.de\/magazin\/wp-content\/uploads\/2019\/05\/peek-hochdruck-kapillarschlauch-unifarbig-150x150.jpg 150w\" sizes=\"(max-width: 300px) 100vw, 300px\" \/><\/a><\/center><\/p>\n<ul style=\"text-align: justify;\">\n<li>Station\u00e4re Phase<\/li>\n<\/ul>\n<p style=\"text-align: justify;\">HPLC-S\u00e4ulen sind mit einem festen, aber por\u00f6sen und druckbest\u00e4ndigem Material, meist einem funktionalisierten Kieselgel, dicht gepackt. Im Vergleich zur normalen Fl\u00fcssigkeitschromatographie im Niederdruckbereich ist die Teilchengr\u00f6\u00dfe der station\u00e4ren Phase bei der HPLC mit &lt; 10 \u03bcm erheblich kleiner. Je kleiner die Partikel sind, desto h\u00f6her ist die Trennleistung.<\/p>\n<p style=\"text-align: justify;\">Die Trennung der Probe ist nach verschiedenen Prinzipien wie Adsorption-, Ionenaustausch- und Gr\u00f6\u00dfenausschluss-Chromatographie m\u00f6glich und er\u00f6ffnet so eine vielseitige Bandbreite der m\u00f6glichen Anwendungen.<\/p>\n<p><center><a href=\"https:\/\/www.rct-online.de\/de\/schlauchverbinder\/verbinder-aus-kunststoff\/kapillar-verbinder-fuer-die-hplc\/gerader-kapillar-verbinder-mit-aussengewinde-aus-pp\"><img loading=\"lazy\" decoding=\"async\" class=\"alignnone wp-image-3549 size-full\" title=\"Gerader-Kapillar-Verbinder mit Au\u00dfengewinde aus PP\" src=\"https:\/\/www.rct-online.de\/magazin\/wp-content\/uploads\/2019\/05\/gerader-kapillar-verbinder-mit-aussengewinde-aus-pp.jpg\" alt=\"gerader-kapillar-verbinder-mit-aussengewinde-aus-pp\" width=\"300\" height=\"300\" srcset=\"https:\/\/www.rct-online.de\/magazin\/wp-content\/uploads\/2019\/05\/gerader-kapillar-verbinder-mit-aussengewinde-aus-pp.jpg 300w, https:\/\/www.rct-online.de\/magazin\/wp-content\/uploads\/2019\/05\/gerader-kapillar-verbinder-mit-aussengewinde-aus-pp-150x150.jpg 150w\" sizes=\"(max-width: 300px) 100vw, 300px\" \/><\/a> <a href=\"https:\/\/www.rct-online.de\/de\/schlauchverbinder\/verbinder-aus-kunststoff\/kapillar-verbinder-fuer-die-hplc\/hochdruck-gerader-kapillar-verbinder-aus-peek\"><img loading=\"lazy\" decoding=\"async\" class=\"alignnone wp-image-3550 size-full\" title=\"Hochdruck-Gerader-Kapillar-Verbinder aus PEEK\" src=\"https:\/\/www.rct-online.de\/magazin\/wp-content\/uploads\/2019\/05\/hochdruck-gerader-kapillar-verbinder-aus-peek.jpg\" alt=\"hochdruck-gerader-kapillar-verbinder-aus-peek\" width=\"300\" height=\"300\" srcset=\"https:\/\/www.rct-online.de\/magazin\/wp-content\/uploads\/2019\/05\/hochdruck-gerader-kapillar-verbinder-aus-peek.jpg 300w, https:\/\/www.rct-online.de\/magazin\/wp-content\/uploads\/2019\/05\/hochdruck-gerader-kapillar-verbinder-aus-peek-150x150.jpg 150w\" sizes=\"(max-width: 300px) 100vw, 300px\" \/><\/a><\/center><\/p>\n<p style=\"text-align: justify;\">Meist erfolgt die Trennung aufgrund der Polarit\u00e4tsunterschiede zwischen mobiler und station\u00e4rer Phase. Man unterscheidet dabei zwischen Normalphasen-HPLC mit einer polaren station\u00e4ren und einer unpolaren mobilen Phase (NP) und Umkehrphasen-HPLC (RP) mit entsprechend vertauschten Polarit\u00e4ten.<\/p>\n<p style=\"text-align: justify;\">Die Polarit\u00e4ten der station\u00e4ren und mobilen Phasen haben erheblichen Einfluss auf die Retentionszeit, die Laufzeit einer Substanz durch die S\u00e4ule. Eine Substanz besitzt keine bzw. nur sehr schwache Wechselwirkungen mit einer unpolaren station\u00e4ren Phase und hat deshalb eine kurze Retentionszeit.<\/p>\n<p style=\"text-align: justify;\">Da die Normalphasen-HPLC jedoch schwieriger in der Handhabung ist, z. B. wegen Probleme durch Wasser im L\u00f6semittel, ist heute die Umkehrphasen-HPLC die sehr viel \u00f6fter eingesetzte Methode.<\/p>\n<p><center><a href=\"https:\/\/www.rct-online.de\/de\/schlauchverbinder\/verbinder-aus-metall\/kapillar-verbinder-fuer-die-hplc\/gerader-kapillarverbinder-aus-edelstahl-komplett\"><img loading=\"lazy\" decoding=\"async\" class=\"alignnone wp-image-3554 size-full\" title=\"Gerader-Kapillarverbinder aus Edelstahl | komplett\" src=\"https:\/\/www.rct-online.de\/magazin\/wp-content\/uploads\/2019\/05\/gerader-kapillarverbinder-aus-edelstahl-komplett.jpg\" alt=\"gerader-kapillarverbinder-aus-edelstahl-komplett\" width=\"300\" height=\"150\" \/><\/a> <a href=\"https:\/\/www.rct-online.de\/de\/schlauchverbinder\/verbinder-aus-metall\/kapillar-verbinder-fuer-die-hplc\/hohlschraube-aus-edelstahl-1.4571\"><img loading=\"lazy\" decoding=\"async\" class=\"alignnone wp-image-3555 size-full\" title=\"Hohlschraube aus Edelstahl 1.4571\" src=\"https:\/\/www.rct-online.de\/magazin\/wp-content\/uploads\/2019\/05\/hohlschraube-aus-edelstahl-1-4571.jpg\" alt=\"hohlschraube-aus-edelstahl-1-4571\" width=\"300\" height=\"300\" srcset=\"https:\/\/www.rct-online.de\/magazin\/wp-content\/uploads\/2019\/05\/hohlschraube-aus-edelstahl-1-4571.jpg 300w, https:\/\/www.rct-online.de\/magazin\/wp-content\/uploads\/2019\/05\/hohlschraube-aus-edelstahl-1-4571-150x150.jpg 150w\" sizes=\"(max-width: 300px) 100vw, 300px\" \/><\/a><\/center>&nbsp;<\/p>\n<ul style=\"text-align: justify;\">\n<li>Mobile Phase<\/li>\n<\/ul>\n<p style=\"text-align: justify;\">Bei der Auswahl des Eluents k\u00f6nnen Polarit\u00e4ts\u00fcbersichten beziehungsweise elutrope Reihen helfen. F\u00fcr eine Vielzahl von Gemischen ben\u00f6tigt man L\u00f6sungsmittelgemische, mit denen gezielt die Polarit\u00e4t und damit auch die Elutionskraft eingestellt werden kann. Mittels elektronisch gesteuerter Mischer f\u00fcr die L\u00f6sungsmittel lassen sich Polarit\u00e4tsgradienten des Eluenten einstellen.<\/p>\n<h2><span class=\"ez-toc-section\" id=\"Anwendungsbreite_einer_Hochleistungsfluessigkeitschromatographie\"><\/span>Anwendungsbreite einer Hochleistungsfl\u00fcssigkeitschromatographie<span class=\"ez-toc-section-end\"><\/span><\/h2>\n<ul>\n<li style=\"text-align: justify;\">Analytisch<\/li>\n<\/ul>\n<p style=\"text-align: justify;\">Die analytische Identifizierung einer Substanz erfolgt meist durch Vergleich der Retentionszeiten der Probe mit derjenigen eines Vergleichsstoffes. Man kann beispielsweise Probe und Vergleich mischen und zusammen injizieren, es sollte sich dann ein vergr\u00f6\u00dferter Peak ergeben. Wird jedoch ein zweiter Peak eluiert, sind Probe und Vergleichsstoff nicht identisch. Durch Wiederholen der Analyse nach Wechseln der mobilen Phase kann weitestgehend sichergestellt werden, dass die Peaks sich nicht nur zuf\u00e4llig \u00fcberlagert haben.<\/p>\n<p style=\"text-align: justify;\">Noch h\u00f6here Sicherheit bringt das Wechseln der station\u00e4ren Phase (z. B. Umkehrphasen- statt Normalphasen-HPLC). Hundertprozentige Sicherheit erh\u00e4lt man allerdings nur die qualitative Analyse der Substanz zum jeweiligen Signal. Dies kann auch mit spezifischen nachgeschalteten Detektoren, wie Massenspektroskopie oder Diodenarray, mit dem das gesamte UV\/Vis-Spektrum eines Signals aufgezeichnet wird, erreicht werden.<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<ul style=\"text-align: justify;\">\n<li>Pr\u00e4parativ<\/li>\n<\/ul>\n<p style=\"text-align: justify;\">Genau wie eine normale S\u00e4ulenchromatographie, l\u00e4sst sich eine HPLC auch zur Reinigung von Substanzen, wie beispielsweise von pharmazeutischen Produkten oder biologischer Proben, verwenden. In der Regel werden daf\u00fcr S\u00e4ulen mit gr\u00f6\u00dferen Innendurchmessern ben\u00f6tigt, weil die Mengen der aufzureinigenden Proben meist um ein Vielfaches gr\u00f6\u00dfer sind als bei analytischen Trennungen.<\/p>\n<h2><span class=\"ez-toc-section\" id=\"Bedeutung_in_der_Biochemie\"><\/span>Bedeutung in der Biochemie<span class=\"ez-toc-section-end\"><\/span><\/h2>\n<p style=\"text-align: justify;\">Durch die Vielzahl der verschiedenen Trennprinzipien und durch unterschiedlichste Detektoren ist die Hochleistungsfl\u00fcssigkeitschromatographie ein sehr vielseitiges und potentes Analysetool, vor allem auch in der Biochemie, wo Gemische aus Biopolymeren, wie Nukleins\u00e4uren, Aminos\u00e4uren, Peptide oder Enzyme, identifiziert werden m\u00fcssen. Bei entsprechender Dimensionierung der S\u00e4ulen ist die HPLC auch f\u00fcr pr\u00e4parative Trennungen zur Reindarstellung von Stoffen aus Gemischen geeignet. Sie ist damit insbesondere f\u00fcr das biochemische Labor unverzichtbar geworden.<\/p>\n<blockquote>\n<p style=\"text-align: justify;\">Auch f\u00fcr medizinische Zwecke, wie die Bestimmung des Vitamin D-Gehalts im Blut, wird die Hochleistungsfl\u00fcssigkeitschromatographie heute eingesetzt.<\/p>\n<\/blockquote>\n<p style=\"text-align: justify;\">Weitere typische Anwendungen beinhalten die Analyse von Polymeren, Wirkstoffen und Schadstoffen, Reinheitskontrollen oder Mengenbestimmungen, z. B. von Wirkstoffen in biologischen Proben. Auch in der Trinkwasserkontrolle wird HPLC-Analytik heute standardm\u00e4\u00dfig verwendet.<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>HPLC steht f\u00fcr High Performance Liquid Chromatography, auf Deutsch Hochleistungsfl\u00fcssigkeitschromatographie. Sie wird sowohl f\u00fcr pr\u00e4parative wie auch analytische Stofftrennungen eingesetzt. Besonders hilfreich ist die HPLC f\u00fcr die Biochemie bei der Pr\u00e4paration und Analyse von Stoffen mit hohen Molekulargewichten wie Proteinen. Was ist Fl\u00fcssigchromatographie? 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